Векторные системы на основе вируса SV40 (вирусные и плазмидные вектора).
ПЛАЗМИДНЫЕ ВЕКТОРА
ВИРУСНЫЕ ВЕКТОРА Организация экспрессионных кассет в векторных системах для животных. Способы достижения высокого уровня экспрессии чужеродных генов в животных клетках.
Базовыми элементами эукариотической экспрессионной кассеты является промотр и сайт полиаденилирования,в котором формируется 3'-конец транскрипта.В отличие от сигналов процессинга мРНК,которые функционируют эфеективно во всех типах клеток животных,детальное строение промоторов и энхансеров значительно варьирует у разных генов.Многие энхансеры активны только в определенных тканях или действуют только в пристствии определенных факторов.Эти обстоятельства следует учитывать при выборе или конструировании векторов.Наиболее уникальны вирусы энхансеры вирусов SV40 и саркомы Рауса.Сигналы сплайсинга хотя и универсальны ,но не безразличны к прилегающим к ним экзонным последовательностям.В случае конструирования рекДНК,в транскрипте которой будут соеденены не взаимодействующие в норме сигналы сплайсинга,сплайсирование может быть неточным.Апробирование различных эукариотических экспрессионных кассет было проведено путём их конструирования в составе плазмиды pBR322 и последующим наблюдением временной экспрессии после трансформации клеток.Для достижения высокого уровня экспрессии чужеродных генов в животных клетках следует учитывать некоторые правила. -вторичная структура в 5'-нетранслируемой области мРНК препятствует эффективной странсляции -кодон АУГ в 5'-нетранслируемой области мРНК мешает правильному инициирующему кодону -Консенсусом около инициирующего кодона у высших эукариот является последовательность CC(A/G)CCAUGG Отмечено,кроме того,что присутствие AU-богатой области в 3'-нетранслируемой области мРНК уменьшает ее стабильность. Селективные маркеры в векторных системах животных Маркер – гены кодирующие устойчивость к АБ либо токстческим веществам , клонированные в плазмиды. 1. Гены, продукты которых осуществляют метаболтзм азотистых оснований : - аденинфосфорибозил трансфераза -гипоксантингуанинфосфорибозил трансфераза - тимидинкиназы -ксантингуанинфосфорибозил трансфераза ( реципиенты – только мутантные клетки) 2. Гены, обеспечивающие селекцию в случае их мультипликации (дигидрофосфатредуктаза)- позволяют работать с немутантами 3. Гены-репортеры (cat, lux, lac Z) 4. Гены бактериального происхождения (gpt, neo)- позволяют работать с немутантами
Популярное: Почему двоичная система счисления так распространена?: Каждая цифра должна быть как-то представлена на физическом носителе... Модели организации как закрытой, открытой, частично открытой системы: Закрытая система имеет жесткие фиксированные границы, ее действия относительно независимы... Почему стероиды повышают давление?: Основных причин три... ©2015-2024 megaobuchalka.ru Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. (362)
|
Почему 1285321 студент выбрали МегаОбучалку... Система поиска информации Мобильная версия сайта Удобная навигация Нет шокирующей рекламы |